一、产品概述由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为针对RBM9RNA结合基序蛋白9亦称FOX2/RBFOX2的兔源多克隆抗体货号A300-864A经抗原亲和纯化适用于流式细胞术Flow Cyt、免疫组化IHC、免疫沉淀IP及Western BlotWB检测。RBM9是Fox家族前体mRNA剪接调控蛋白的重要成员在组织特异性可变剪接中发挥开关作用调控外显子包含/跳跃同时被鉴定为雌激素受体ER的负向协同调节因子。二、关键规格参数参数 | 详细信息靶标 | RBM9 / FOX2 / RBFOX2反应性 | 大鼠、小鼠、人宿主 | 兔克隆性 | 多克隆免疫原 | 人RBM9蛋白第1至50位氨基酸之间的区域亚型 | IgG纯化方式 | 抗原亲和纯化浓度 | 1000 ug/ml存储条件 | 2 - 8 °C保质期 | 收货后1年缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液pH 7-8含0.09%叠氮化钠三、免疫原与特异性识别本抗体识别的表位位于人RBM9蛋白第1至50位氨基酸残基之间参考编号NP_055124.1GeneID 23543。该区域对应RBM9的N末端结构域包含独特的RNA识别基序RRM上游序列可有效区分RBM9与其他Fox家族成员如RBM10/FOX3。抗体通过固相载体上固定的FOX2/RBM9特异性表位进行亲和纯化确保高特异性和低背景。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4。种属交叉反应性已验证反应性包括人、小鼠、大鼠适用于跨物种研究。四、应用方法与推荐条件4.1 Western BlotWB参数 | 条件稀释比例 | 1:2000 - 1:10,000封闭/稀释液 | 5% 脱脂牛奶-TBST一抗孵育 | 过夜孵育二抗细胞裂解液WB | 山羊抗兔IgG重链和轻链抗体货号A120-101P二抗免疫沉淀物WB | 抗兔IgG轻链HRP结合抗体封闭液中添加5%正常猪血清货号S100-020操作提示RBM9在多种组织/细胞中表达水平中等推荐起始稀释度为1:2000。若信号过强可上调至1:5000-1:10000。4.2 免疫沉淀IP参数 | 条件推荐用量 | 6 ug 抗体 / mg 细胞裂解蛋白该用量经验证可在人、小鼠或大鼠细胞裂解液中有效富集RBM9蛋白。建议使用蛋白A/G磁珠或琼脂糖珠进行捕获。4.3 免疫组化IHC参数 | 条件稀释比例 | 1:2000 - 1:10,000极宽范围推荐从1:2000起始抗原修复 | 推荐使用柠檬酸盐缓冲液pH 6.0进行热诱导抗原修复样本类型 | 福尔马林固定、石蜡包埋FFPE组织切片操作提示本抗体在IHC中表现优异稀释比高达1:10,000极其经济。建议使用高压或微波修复法柠檬酸盐pH 6.0为最佳选择。4.4 流式细胞术Flow Cytometry参数 | 条件固定与透化 | 4% 甲醛固定随后用90%甲醇透化抗体用量 | 0.25 ul / 1 × 10^6 细胞详细流程1. 收集细胞1×10^6个/样本用PBS洗涤一次2. 加入1 mL 4%甲醛室温固定15分钟3. PBS洗涤后加入1 mL 90%预冷甲醇冰上透化15-30分钟4. PBS洗涤两次重悬于含0.25 ul抗体的100 ul孵育缓冲液中室温避光孵育30-60分钟5. 洗涤后加入荧光标记二抗上机检测。注意事项甲醇透化步骤对抗原暴露至关重要不可省略。本用量为经验值初次实验建议进行滴定0.1-0.5 ul/10^6细胞。五、存储与稳定性存储温度2 - 8°C请勿冷冻。高浓度1000 ug/ml配方在冷藏条件下极为稳定。保质期收货后1年内保持完整活性。防腐剂含0.09%叠氮化钠可抑制微生物污染。若下游应用涉及HRP检测如WB或IHC中直接使用HRP二抗叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性需通过透析或脱盐柱去除。缓冲液体系Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液pH 7-8兼容多数免疫检测体系。本产品适用于RNA剪接调控、激素受体信号通路、发育生物学及肿瘤相关研究领域