一、PCSK9的发现与作用机制PCSK9是一种由肝脏合成并负责调控蛋白质活性的丝氨酸蛋白酶于2003年被首次报道。2004年研究发现鼠科动物试验中PCSK9过表达引起LDL-R减少同时LDL-C升高。2005年有研究报道人群中PCSK9功能缺失突变可降低LDL-C水平。2011年临床前研究发现PCSK9功能缺失的患者LDL-C降低28%冠心病风险降低88%。肝细胞表面的LDL-R可与LDL结合由网格蛋白包被囊泡胞吞内化将LDL-C整合入细胞内随后LDL-R回到细胞表面循环利用。PCSK9可与肝细胞表面的LDL-R结合PCSK9/LDL-R复合物内吞进入肝细胞并在溶酶体中降解导致肝细胞表面的LDL-R减少血液中LDL-C水平升高。TR-FRET PCSK9(D347Y)/LDLR检测试剂盒可用于定量检测PCSK9与LDLR的结合活性为研究该蛋白的生物学功能提供技术工具。二、他汀类药物的临床应用与局限性他汀类药物通过竞争性抑制内源性胆固醇合成限速酶HMG-CoA还原酶来降低细胞内胆固醇水平使血清LDL-C降低。该类药物的原研药专利均已过期进入多种仿制药竞争的市场环境。他汀类药物在临床应用中存在一定的局限性部分患者会出现他汀不耐受临床常见症状有肌炎、肌痛、横纹肌溶解和肝损伤等。有些患者即使使用最大剂量也不能达到满意的调脂效果。这些局限性促使研究者开发新型降脂药物PCSK9抑制剂成为重要的研发方向。三、PCSK9抑制剂的研发思路根据PCSK9的作用机制抑制其活性或降低其水平可提高肝细胞表面LDL-R数量增加血液中LDL-C的转化。靶向PCSK9的血脂调节药主要有两种研发思路一是阻止PCSK9与LDL-R的结合如单克隆抗体、模拟肽和类抗体蛋白药二是抑制PCSK9分子的表达或干扰其分泌如小干扰RNA、反义寡核苷酸和小分子抑制剂。2012年新英格兰医学杂志报道了PCSK9单抗的临床I期试验证实其可显著降低健康志愿者和家族性高胆固醇血症受试者的LDL-C。TR-FRET技术可应用于筛选能够阻断PCSK9与LDLR结合的分子评估其阻断效率。四、PCSK9单克隆抗体的临床研究PCSK9单克隆抗体通过靶向血浆PCSK9发挥作用目前临床应用较广泛的包括依洛尤单抗和阿利西尤单抗。FOURIER研究在27564例ASCVD患者中评估了依洛尤单抗的疗效结果显示治疗48周可显著降低MACE事件风险达15%并降低缺血性卒中风险达20%。ODYSSEY OUTCOMES研究在18924例ACS患者中评估了阿利西尤单抗的疗效亚组分析表明对于既往缺血性卒中患者治疗78周可显著降低缺血性卒中风险。GLAGOV研究表明他汀联合PCSK9抑制剂治疗76周后64%的患者实现了动脉粥样硬化斑块逆转。这些临床研究证实了PCSK9单克隆抗体的有效性和安全性。五、小干扰RNA药物的研发进展小干扰RNA药物inclisiran通过诱导PCSK9 mRNA降解阻止其翻译成蛋白质实现长效治疗。Ⅰ期临床试验中单剂量和多剂量方案均使LDL-C和PCSK9水平显著降低作用可持续达6个月。Ⅲ期ORION-10和ORION-11试验结果显示治疗510天时LDL-C水平分别降低了52.3%和49.9%不良事件均为轻度或中度。该药物每年2次皮下注射的给药方式为患者提供了更便捷的治疗选择。TR-FRET PCSK9(D347Y)/LDLR检测试剂盒可用于评估该类药物对PCSK9与LDLR结合的间接影响验证其作用机制。六、PCSK9抑制剂的临床价值评估PCSK9抑制剂作为新型降脂药物与他汀类药物相比具有不同的作用机制和临床定位。对于他汀不耐受或他汀治疗后血脂仍不达标的患者PCSK9抑制剂提供了重要的治疗选择。临床研究证实PCSK9抑制剂可显著降低LDL-C水平并降低心血管事件风险。然而皮下注射的给药方式和高昂的治疗成本限制了其广泛应用。随着小干扰RNA药物等新型制剂的开发给药频率降低患者的依从性有望提高。TR-FRET PCSK9(D347Y)/LDLR检测试剂盒在该类药物研发和质量控制中具有重要应用价值可提供高通量、高灵敏度的结合活性检测。