Masson染色原理、步骤、判读及常见问题

Masson染色是组织病理检测中经典的三色染色技术由法国医生Claude L. Masson研发是病理实验中区分胶原纤维与其他软组织成分的手段。在慢性炎症、机化及瘢痕形成过程中胶原纤维会随着病理进展而出现。早期在H-E染色切片中这些纤维常与纤维蛋白难以分辨而胶原纤维特异性染色则可提供确证。例如慢性肾小球肾炎肾小球纤维化后Masson染色呈蓝色大叶性肺炎或血栓机化后原有纤维蛋白灶内出现胶原纤维染色呈蓝色风湿性肉芽肿静止期阿绍夫巨细胞消失病灶内纤维被胶原纤维取代染色呈蓝色胃、十二指肠溃疡愈合期溃疡底部形成胶原纤维性瘢痕慢性阑尾炎时阑尾壁出现纤维化肝硬化时胶原纤维增生——上述病变均可通过Masson染色清晰显示染液原理Weigert铁苏木素染液由A液苏木素与B液三氯化铁组成需现配现用、临用混合核心作用是特异性染色细胞核使核结构清晰显色、边界分明。酸性品红-丽春红染液特异性结合肌肉组织、细胞质、纤维蛋白等成分将其染为鲜红色是区分软组织与胶原纤维的基础染色试剂。磷钼酸-磷钨酸分色液关键分色试剂具备选择性脱色作用可洗脱胶原纤维表面的红色染料同时保留肌肉、胞浆等组织的红色为后续胶原纤维特异性染色奠定基础。苯胺蓝/亮绿染液胶原纤维专属染色液苯胺蓝可将胶原纤维染为蓝色亮绿可将其染为绿色可根据实验需求灵活选择。1%冰醋酸弱酸溶液用于后期酸化固定强化各组织成分的色彩对比度避免染色模糊、串色问题。染色步骤脱蜡与水化将石蜡切片依次浸入二甲苯Ⅰ20 min→ 二甲苯Ⅱ20 min→ 无水乙醇Ⅰ10 min→ 无水乙醇Ⅱ10 min→ 95%酒精5 min→ 90%酒精5 min→ 80%酒精5 min→ 70%酒精5 min→ 蒸馏水洗。细胞核染色用试剂盒中的Weigert铁苏木素染色5 min自来水冲洗1%盐酸酒精分化数秒自来水洗流水返蓝数分钟。丽春红染色丽春红酸性品红液染色5–10 min蒸馏水快速漂洗。磷钼酸处理磷钼酸水溶液处理约3–5 min。苯胺蓝复染不经水洗直接以苯胺蓝液复染5 min。分化1%冰醋酸处理1 min。脱水、透明、封片依次置入95%酒精Ⅰ5 min→ 95%酒精Ⅱ5 min→ 无水乙醇Ⅰ5 min→ 无水乙醇Ⅱ5 min→ 二甲苯Ⅰ5 min→ 二甲苯Ⅱ5 min取出稍晾干中性树胶封片。结果判读胶原纤维呈蓝色或绿色。形态上可表现为束状、网状或弥漫分布的蓝色/绿色区域。正常组织中可见于皮肤真皮、肌腱、器官被膜等部位在纤维化病变区域则表现为蓝色/绿色异常增深、增宽。肌纤维呈红色。心肌、骨骼肌的横纹以及平滑肌细胞均呈现束状排列的红色条带。胞浆呈深浅不一的红色。纤维素呈红色。多见于血栓或炎症区域表现为均质或网状的红色物质。红细胞呈橘红色或黄色位于血管腔内。细胞核呈蓝黑色或黑褐色形态为卵圆形或圆形结构清晰。常见问题1. 胶原纤维着色浅甚至不着色可能原因磷钼酸/磷钨酸分色过度苯胺蓝染色时间不足组织固定不佳。解决措施适当缩短分色时间延长苯胺蓝染色时间确保采用中性福尔马林充分固定。2. 肌纤维等红色成分不鲜明可能原因酸性品红染色不足磷钼酸/磷钨酸处理过度导致红色被洗脱冰醋酸处理时间过长。解决措施延长酸性品红染色时间严格控制分色步骤缩短冰醋酸处理时间。3. 背景不干净颜色对比模糊可能原因苏木素染色过深或分化不完全脱蜡不彻底染液陈旧或含沉淀。解决措施确保盐酸酒精充分分化彻底脱蜡过滤染液或更换新试剂。4. 细胞核染色过浅可能原因苏木素染色时间短返蓝不充分。解决措施延长苏木素染色时间确保流水充分冲洗返蓝。